二十二、藥品衛生檢驗方法通則

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更新時間: 2013-08-29

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一、供試品取樣及注意事項

  1.供試品取樣應有一定數量,以使檢驗結果有代表性。因此,正常的供代品,一般每悠批應隨機抽取兩瓶或兩盒以上的包裝單位。檢驗時每次量少應分取兩瓶(盒)以上的樣品共10g或10ml,中藥蜜丸至少應分取4丸以上共10g;貴重或微量包裝的供試品,取樣最可酌減。

  2.凡異常的供試品,則選取有疑問的樣品進行檢驗。

  肉眼能看出發霉生蟲變質、活蟎的樣品,應判為不合格,無需再作抽樣檢驗。

  3.檢查活蟎的樣品抽樣量,見活蟎的檢驗法。

  4.供試品在檢驗前,應嚴格保持包裝的原有狀態,不得啟開。防止再污染。並放在陰涼乾燥處,防止微生物再繁殖,以免影響檢驗結果。凡已將原包裝啟開,則無代表性,應另行取樣。

  5.供試品在檢驗過程中,從開封至全部檢驗操作時結束,須防止微生物再污染和擴散。凡直接與樣品的接觸的用具,均應事先滅菌並保持無菌;全部操作須在無菌室內進行,或在相應的條件下,按無菌操作規定進行。

  6.供試品稀釋后,須在1-2小時內操作完畢,防止微生物繁殖或死亡。

  7.供試品稀釋成供試劑液后,應在均勻狀態下取樣。凡因抑制菌或不溶於水的劑型,其供試品應作特殊處理後進行檢驗。

  8.從供試品檢出大腸桿菌或其他致病菌的報告發出起,該菌促保存一個月備查。如有疑問,可送葯檢部門或上一級檢單位複核。

  二、供試品製備

  1.凡固體樣品,應稱取10g,加在100ml稀釋劑(生理鹽水或磷酸鹽緩衝液)中,經充分研磨或振搖製成試液。液體樣品則可量取10ml加在90ml稀釋劑中,混勻后成供試液。

  2.凡含有防腐劑或抑或菌成分且影響檢驗的供試品,可經離心沉澱集菌法及其化適宜的方法處理后,檢驗大腸桿菌和其他病菌。集菌處理法如下:

  取供試液10ml,以無菌手續放在滅菌尖底刻度離心管中,經每分鐘3500轉以上離心沉澱30分鐘,用滅菌毛細吸管取上清液棄掉,並留管底的2ml殘餘液,將基全部洗凈加在培養基中,進行增菌檢驗。含有不溶性藥渣的樣品稀釋液,可均勻吸取10ml放在離心管中,先經每分鐘500轉左右離心沉澱5分鐘,取其上清液放在另一滅菌尖底類刻度離心管中,經每分鐘約3500轉以上離心沉澱30分鐘,輕輕吸取上清液棄掉,取其管底的2ml殘餘淮全部洗凈加在培養基中,半菌檢驗即得。

  3.非水溶性的軟膏、乳膏、油膏劑等,可稱取樣品5克,放在乳缽或杯中,加8ml滅菌的吐溫-80充分研磨勻后,加入經140℃乾熱滅菌半小時的西黃蓍膠2.5g研磨勻。再加少量45℃的稀釋劑充分研磨使成均勻乳劑隨後邊加入稀釋邊研磨使成100ml乳劑移至三我瓶中,即為1:20供試液。

  或稱取供試品2.5g,分別量取液體石蠟10ml,吐溫-8010ml,稀釋劑30ml。先將供試品置乳缽中,邊研磨邊滴加液體石蠟;然後再邊研磨邊滴咖吐溫-80,研磨均勻后,再邊加入稀釋劑邊研磨,開始每次約1ml,待起團塊后,加入稀釋劑3ml,稍停一分鐘,再輕輕研磨至乳化,將稀釋加完止。即得1:20供試液。

  4.濾膜法:取規定量的供量的供試品,按1ml加入滅菌生理鹽水50ml左右,搖勻,用滅菌吸管或注射器注入薄膜過濾器內,減壓抽干后,用滅菌生理鹽水或其他適宜的溶劑沖洗薄膜3次,每次5ml。取出蒲膜,剪成幾條,加至10ml滅菌稀釋劑中,充分搖動,使成供試液。可供細菌、酵母菌和黴菌計數用。或將成幾條的上述蒲膜有加至有關的增菌培養基中培養,或供檢查綠膿桿菌或金黃色葡萄球菌用。

  三、陽性菌株對照試驗

  1.為便於研究觀察成藥製劑中,某些含有防腐劑和抑制菌成分的干擾作用,以及測試常規檢驗方法和培養基、試劑等的靈敏度時,可將定量的已知陽性對照菌加在供試品稀釋液中,按檢驗供試品的操作方法進行陽性菌的對照試驗,陽性對照菌應生長。

  2.常用的陽性對照菌株,衛生部檢定所編號:大桿菌44102、沙門氏菌50094、綠膿桿菌10104、金黃色葡萄球菌26003和破傷風桿菌64067等。

  3.對照試驗加入的已知活菌量,每批試品應控制在50-100個範圍之內,需氧菌常用的計數方法,如金黃色葡萄球可用37℃培養18-20小時新鮮肉湯培養物,十倍遞增稀釋至10-6,取其0.1ml按瓊脂平板表面塗抹法或取10-7稀釋液1ml按澆碟法進行活菌數測定。按每ml菌菌液內所含的活菌量,取適量加在供試品量對照檢驗即得。破傷風桿菌的陽性對照以作毒力試驗為主(具體操作見破傷風桿菌檢驗項目)。

  4.作陽性株對照試驗時,注意安全,嚴格防止污染供試品和環境。為此,加入陽性菌的操作可另外無適宜的地方進行。

檢驗方法

  一、細菌總數測定法

  細菌總數的測定,是考察供試品每g或每ml內所污染的活菌數量。測定結果便於判明供試品被細菌染的程度,以及生產單位所在用的藥品原料、工具設備和工藝流程、操作者的衛生狀況,是對供試品進行衛生學總評價的綜合依據。

  二、酶菌總數測定法

  黴菌總數(包括酵母菌)的測定,是考察供試品每g或每ml內所污染活的酵母菌、黴菌數量,供以判明供試品酵母菌。黴菌污染程度及其一般生物狀況。

  三、大腸桿菌檢驗法

  大腸桿菌來源於人和溫血動物的糞便。凡由供試品中檢出大腸桿菌時,表明該藥品已被糞便污染,患者服用后,有被糞便中可能存的其它腸道病菌和寄生蟲卵等病源體感染的危險。因此,大腸桿菌被列為重要的省沙門氏菌,是非規定滅菌口服藥品的常規必檢項目之一。

  四、沙法氏菌檢驗法

  主要寄生在人體,哺乳動物和家禽的腸道內,可隨同糞便的排泄污染水源、食品與藥品。沙門氏菌的種類繁多,有些對人有致病力,如傷寒沙門氏和副傷寒沙門氏菌;有些對動物有致病力,如鴨沙門氏菌和雛沙門氏菌;尚有一些對人和動物皆有致病力,如腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌和豬霍亂沙門氏菌等,它們能引起人類傷寒症、急性胃腸炎和敗血症等。

  帶有這些細菌的人與動物常可直接或間接地污染藥品的生產環境、工具設備和原料、輔料,以及半成品和成品。特別是用動物臟器製成藥品,污染機率較高,影響患者用藥安全,並有可能通過藥品的流通而傳播,故將沙門氏菌,應列為藥品的必檢項目。

  五、綠膿桿菌檢驗法

  假單胞菌屬的綠膿桿菌對人類有致病力,同藥品衛生有關。特別在大面積的燒傷,燙全國各患者,眼科疾病和其他外傷方面,常因感染綠膿桿菌后病情加重,造成患者傷處化膿,並可引起菌血症等,眼角膜潰瘍甚至失明,損害病人健康。因此一般眼科製劑和外傷用藥,規定不得檢出綠膿桿菌。

  六、金黃色葡萄球檢驗法

  金黃色葡萄球在自然界分佈較廣,常可污染藥品及食品,是葡萄狀球菌中對人類致病力最強的一種,能引起人體局部化膿性病灶,嚴重時可致敗血症。某些溶血性菌株尚可產生耐熱性的腸毒素,加熱到100℃、30分鐘毒素不致破壞,有時細菌已被殺死,毒素仍然存在,以致引起急性胃腸炎,是人類食物中毒症的常見病因之一。因此,目前規定凡外用藥品、眼科製劑不得檢出金黃色葡萄球菌。

  七、破傷風桿菌檢驗法

  破傷風菌屬於專性厭氧梭狀芽孢桿菌屬,廣泛分佈於泥土上層吸入人和牲畜的糞便中,以根,莖類植物為原料的藥品。常可受到污染。本菌為專性厭氧菌、菌體細長,周身有鞭毛,能運動。成熟的芽孢的菌體似鼓槌狀,是破傷風桿菌的形態特徵。本菌為革蘭氏染色陽性,但培養較久后常為革蘭氏染色陰性。其繁殖體的抵抗力同其它無芽孢菌相似,而芽孢則有高度抵抗力,經溫熱100℃;乾熱150℃一小時尚參存活,在塵埃或土壤中可數年不死。

  破傷風病主要由破傷風桿菌的外毒素棗神經毒素引起的,這種毒素有選擇性地作用於神經系統,特別是能引起脊髓前角細胞中,從面發生伸肌痙攣性收縮,呈角弓反張強直狀態是破傷風特有的抽搐癥狀。因此,用於湥部組織、創傷和潰瘍面的外用製劑不得檢出破傷風桿菌。

  八、活蟎檢驗法

  蟎,屬於節肢動物門,蜘蛛綱,蜱蟎目,種類繁多,分佈甚廣。其生活習性各異營自由生活或寄生生活。在土壤、池沼和江河湖海里,動植物體上,貯藏食品和藥品中,都有它們的存在。體形微小、多在一毫米以下,一般呈圓形或卵圓形,頭胸腹分界不明顯。幼蟎足三對,成蟎足多數為四對,足由六節組成。口器向前端突出,螯肢常呈螯鉗狀,有齒。須肢節數因種類而異由一~二節到五節組成,一般呈爪或鉗狀,偶爾為長形。有些種類在軀體前端背面或兩側有一~二對眼。呼吸通過氣管或體壁進行。軀體兩側對稱,表面被有堅硬的幾丁質的板,保護其內部器官和支持肌肉固定。體表剛毛、它的形狀、數目及彼此間長短比例和排列位置因種類而異,在分類上有重要意義。

  蟎可蛀蝕損壞藥品,使藥品變質失效,並可直接危害人體健康或傳播疾病,例如,中成藥中發現的腐食酪蟎,對人具有致病力。一種是引起皮炎,另一種是引起消化系統、泌尿系統呼吸系統的疾病。因此,用於口br>
  供試品取樣量:每批取兩瓶或兩盒以上的包裝單位;貴重或微量包裝的供試品,取樣量可酌減。

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